医学检验初级中级职称考试小秘籍之医学微生物学(记住这些基本80分以上没问题)

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一、绪论

1.原核细胞型微生物:细菌、放线菌、螺旋体、支原体(无细胞壁)、衣原体、立克次体(仅有原始核、无核膜、无核仁)

2.真核细胞型微生物:真菌和原虫

3.非细胞型微生物:病毒、亚病毒、朊粒

4.正常菌群:常居菌、过路菌、条件致病菌(机会致病菌)

5.条件致病菌可引起内源性感染

6.细菌的致病性:毒力、侵入数量、侵入部位

7.正常情况下,血液、脑脊液中无菌

二、细菌的形态和结构

1.细菌在适宜的培养条件下,具有相对稳定的形态与结构;在不利环境下出现多行性

2.通常以μm为测量单位,菌龄与环境等因素对菌体大小有影响

3.细菌有三种基本形态:

①球形:双球菌、链球菌、葡萄球菌、四链球菌、八叠球菌

②杆形:长短、大小差异很大

③螺旋形:弧菌、螺菌、螺旋体

4.细菌的基本结构

①细胞壁:革兰阳性菌(肽聚糖、磷壁酸)

          革兰阴性菌(肽聚糖、外膜层中有脂多糖),氢氧化钾拉丝试验

②细胞膜(中介体、中间体、类线粒体)

③细胞质:核糖体、核质、质粒(染色体以外的遗传物质,复制不依赖染色体) 、胞质颗粒

5.细菌的特殊结构

①荚膜

②鞭毛:运动(悬滴法)具有H抗原

③菌毛:分为普通菌毛、性菌毛(F菌毛)

④芽孢:具有强大的抵抗力,将芽孢是否被杀死,作为判断灭菌效果的指标(高压蒸汽灭菌法)

6.细菌L型:细菌细胞壁缺陷型(油煎蛋样菌落)

三、细菌的生理

1.细菌的物理性状

①带电现象:革兰阳性菌等电点为pH2-3

            革兰阴性菌等电点为pH4-5

②表面积:体积虽小,单单位体积的表面积远比其他生物细胞大

③光学性质:细菌细胞为半透明体

④半透性与渗透性:细胞壁、细胞膜都有半透性

⑤最适pH:7.2-7.6

2.生长方式:以二分裂方式进行无性繁殖

3.细菌的生长曲线(20-30min分裂一次)

①迟缓期:适应阶段

②对数期:增长极快

③稳定器

④衰亡期

四、细菌的遗传与变异

1.细菌的变异现象

①形态结构变异:细菌受外界环境影响,发生的形态变异,可发生在荚膜、芽孢、鞭毛。如L型菌落

②培养特性变异:S-R变异、病毒突变株

③毒力变异:卡介苗(BCG)

④耐药性变异:通过性菌毛和质粒(R质粒)是细菌耐药性发生改变

⑤抗原性变异:H-O变异(鞭毛变异)

⑥酶活性变异

⑦生化特性变异:乳糖变为不能发酵

2.基因物质的转移和重组

①转化:受体细菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段整合重组

②转导:以噬菌体为媒介,将供体菌的基因转移到受体菌菌内

③结合:受体菌和供体菌直接接触,供体菌通过性菌毛将F质粒或类似遗传物质转移至受体菌的过程

④溶原性转换:噬菌体内的DNA与细菌染色体重组,使宿主菌遗传结构发生改变

⑤原生质融合:两种经过处理使去细胞壁的原生质体混合可发生融合,融合后的双倍体细胞可发生细菌染色体间的重组

3.质粒分类

①耐药性质粒:结合性耐药质粒(R)、非结合耐药性质粒

②Col质粒:编码肠毒素

③Vi质粒:编码细菌与致病性有关的蛋白

④F质粒(致育质粒):编码性菌毛

五、细菌的分类与命名

细菌与原核生物界分类登记以此为:界、门、纲、目、科、属、种

六、微生物检验概述

1.采集的标本均应盛于无菌容器内,而不能用消毒剂或酸类处理

2厌氧菌感染时,应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取

3.若不能及时送检,尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中;脑脊液、滑膜液则需要在25℃保存。保存时间不应超过24h

4.标本采集应适量:血培养时培养基容量:血液量=10:1

5.鲎试验阳性表明有革兰染色阴性菌或内毒素血症

6.实验动物

①无菌动物:就是指不能检出任何活的微生物和寄生虫的动物。

②悉生动物:由无菌动物生产,仅含有特定微生物或寄生虫的动物

③无特殊病原动物:无特定的微生物或寄生虫的动物

④清洁动物:不带有人畜共患病原或烈性传染病病原及常见传染病病原的动物

⑤常规动物:在自然环境中饲养的带菌动物

、细菌形态学检查法

一、显微镜

①普通光学显微镜:最大分辨能力0.25μm

②暗视野显微镜:观察细菌运动

③相差显微镜:观察形态

④荧光显微镜:观察荧光染色

⑤电子显微镜:最大分辨能力1nm

二、不染色细菌标本的检查

1.方法:压滴法、悬滴法

2.检查作用:检查生活状态下细菌的动力及运动状况(霍乱弧菌呈流星状运动)

三、细菌染色标本的检查

1.作用:观察细菌的形态、大小、排列、染色性、特殊结构、异染颗粒(可用于检查白喉棒状杆菌感染,镜下可见异染颗粒)等

2.染料

①酸性染料:伊红、刚果红

②碱性染料:复红、结晶紫、美蓝

3.方法:

①革兰染色:干燥-固定-初染(结晶紫)-媒染(碘)-脱色(酒精)-复染(稀释复红)

②抗酸染色:干燥-固定-初染(稀石碳酸复红)-脱色(3%盐酸酒精)-复染(美兰)

八、培养基

1.培养基凝固物质常用琼脂

2.培养基种类

①基础培养基

②营养培养基:血平板、巧克力平板

③鉴别培养基:酚红

④选择培养基:SS培养基,麦康凯培养基

⑤特殊培养基

3.分离培养基选择

①血平板

②巧克力血平板:奈瑟菌属培养、嗜血杆菌属培养

③中国蓝平板或伊红美兰平板

④麦康凯平板:用于筛选革兰阴性菌,非发酵菌可生长

⑤SS琼脂:用于沙门、志贺菌的分离(肠道菌属的分离)

⑥碱性琼脂或TCBS琼脂:主要成分是硫代硫酸盐、胆盐、枸橼酸盐、蔗糖。用于霍乱弧菌及其他弧菌的分离

⑦血液增菌培养基

⑧营养肉汤

九、细菌的培养与分离技术

一、接种分离法

1.平板划线分离法主要用于挑选出单个菌落用于纯培养

①连续划线分离法:杂菌不多

②分区划线分离法:杂菌较多

2.斜面接种法:主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性

3.液体接种法:多用于液体生化试验管的接种

4.穿刺接种法:主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。入穿刺线变浑浊,说明细菌具有鞭毛

5.倾注平板法:测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法

6.涂布接种法:常用于药敏性测定,也可用于被检验标本中的细菌计数

二、细菌培养的方法

(一)需氧培养法:将平板至于35℃温箱中孵育18-24h

(二)二氧化碳培养法(5-10%)

方法分类:二氧化碳培养箱、烛缸法、化学法

(三)厌氧培养法:用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌的培养

环境指示剂:美兰(无色-蓝色)

三、气味

1.铜绿假单胞菌(生姜气味)

2.变形杆菌(巧克力烧焦气味)

3.厌氧梭菌(腐败的恶臭味)

4.放线菌(泥土味)

十、细菌的生化试验

1.O/F试验所用HL (Hugh-Leifson)培养基含有0.2%蛋白胨、1%葡萄糖。主要用于肠杆菌科(发酵型)与非发酵菌鉴别(产碱型)

 开管封闭管
产碱型
氧化型+
发酵型++

2.β-半乳糖苷酶试验(ONPG):用于迟缓发酵乳糖菌株的快速试验,黄色呈阳性反应

3.吲哚(靛基质)试验:用于肠杆菌科细菌的鉴定,属于蛋白质和氨基酸的代谢试验

4.枸橼酸盐利用试验:不能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌不能生长,属于碳源利用试验

5.氧化酶试验主要用于肠杆菌(阴性)与假单胞菌的鉴别(+)。奈瑟菌属、莫拉菌属也为阳性。

6.过氧化氢酶试验(触酶试验):葡萄球菌和微球菌均能产生过氧化氢酶,而链球菌属为阴性。革兰阳性球菌初步分群试验

7.凝固酶试验:属于间接凝集反应(协同凝集反应),分为玻片法和试管法作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标,也是鉴别葡萄球菌常用的一个试验(金黄色葡萄球菌阳性)

8.CAMP试验:特异性鉴定B群链球菌

9.胆汁溶菌试验:用于肺炎链球菌(+)与甲型链球菌(草绿色链球菌)的鉴别

7.O/129试验:弧菌属、邻单胞菌属对O/129敏感,气单胞菌属耐药

8.杆菌肽试验:A群链球菌与非A群链球菌的鉴别

9.奥普托欣(optochin)试验:肺炎链球菌敏感

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      9月23日